人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP注意事項

一，燒瓶培養的處理程序

在培養瓶中接種細胞并在培養基中完全填充培養基以防止運輸過程中細胞的丟失。

1、收到后，目視檢查培養物是否有微生物污染的宏觀證據。

使用倒置顯微鏡（配備有相位傳感器），仔細檢查是否有微生物污染的證據。還檢查以確定大多數細胞是否仍然附著在燒瓶底部？在運輸過程中，培養物有時被粗略地處理，并且許多細胞經常分離并懸浮在培養基中（但仍然是可行的）。

2、如果細胞仍然附著，無菌去除5至10毫升的運輸介質。可以節省運輸媒介以重復使用。在5%℃的空氣中，在37℃下培養細胞，直到它們準備進行傳代培養。

3.如果細胞沒有附著，無菌地移除燒瓶的全部內容物，并以1000rpm離心5至10分鐘。取出運輸介質并保存。在10毫升這種培養基中重新沉淀顆粒細胞并加入25厘米的燒瓶中。在空氣中5%℃下，在37℃下孵育，直至細胞準備進行傳代培養。

二、傳代程序

體積為75厘米的燒瓶。增加或減少其他尺寸培養容器所需的分離培養基的量。

1、去除和丟棄培養基。

2.用0.25%(w/v)胰蛋白酶0.53mM EDTA溶液沖洗細胞層，除去所有含有胰蛋白酶抑制劑的血清痕跡。

3.添加2.0~3.0 ml胰酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層分散（取決于胰蛋白酶的批）。

注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長培養基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5、在新培養容器中加入適當的細胞懸液等分試樣。

6、培養37°C培養基。

推薦栽培比為1:3∶1:4。

介質更新：每周2至3次

三、冷凍保存程序

該協議使用量在75平方厘米的瓶；比例減少或增加的其他尺寸的分離介質的培養容器的數量。

1、去除和丟棄培養基。

2。簡要沖洗細胞層0.25（w/v）trypsin0.53mm EDTA溶液去除所有痕跡血清含有胰蛋白酶抑制劑。

3。加入2至3毫升的胰蛋白酶-EDTA溶液瓶中，倒置顯微鏡下觀察細胞到細胞層是分散的（通常在1到10分鐘）。

注意：為了避免結塊，不要在擊打或搖晃瓶子時攪拌細胞，等待細胞分離。難以分離的細胞可以放置在37°C以促進擴散。

4、加入6～8毫升的完整生長培養基，輕輕吸液，抽吸細胞。

5。去除胰酶EDTA溶液，將細胞懸液到離心管和旋轉約5 1000rpmfor 10分鐘。

6、低溫保存培養液中的上清液和復蘇細胞。

7、將細胞轉移至低溫瓶，1ml／瓶。

8、低溫容器中的細胞Frozen（NalgENα5100-01）。