大鼠鼓膜表皮干細(xì)胞

大鼠鼓膜表皮干細(xì)胞分離自大鼠鼓膜表皮組織。鼓膜是外耳道與中耳腔之間的半透明薄膜，核心功能為分隔外耳與中耳、傳導(dǎo)聲波，其表皮層為復(fù)層扁平上皮，鼓膜表皮干細(xì)胞是該層的關(guān)鍵成體干細(xì)胞，具有自我更新能力和多向分化潛能，可定向分化為成熟的鼓膜表皮角質(zhì)形成細(xì)胞，在鼓膜損傷修復(fù)、表皮層完整性維持及正常生理功能保障中發(fā)揮核心作用。大鼠鼓膜表皮干細(xì)胞原代培養(yǎng)3天后開始貼壁，形態(tài)呈圓形或橢圓形，核大而圓、居中，胞漿少；培養(yǎng)1-2周后增殖形成克隆樣集落，集落內(nèi)細(xì)胞排列緊密、形態(tài)均一；傳代后細(xì)胞保持干細(xì)胞特性，生長(zhǎng)穩(wěn)定、增殖旺盛，可穩(wěn)定表達(dá)表皮干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物。該細(xì)胞是研究鼓膜表皮再生機(jī)制、鼓膜損傷修復(fù)病理過程及耳科相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制的理想實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?/span>

培養(yǎng)基：大鼠鼓膜表皮干細(xì)胞完全培養(yǎng)基（含FBS、表皮生長(zhǎng)因子、胰島素、Penicillin、Streptomycin等）

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)，呈克隆樣增殖

細(xì)胞形態(tài)：圓形、橢圓形（未分化狀態(tài)），增殖期可呈短梭形

傳代比例：1:2-1:3

傳代特性：可穩(wěn)定傳代6-8代；3-5代以內(nèi)干細(xì)胞特性最穩(wěn)定，狀態(tài)最佳

消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液

大鼠鼓膜表皮干細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)室采用胰蛋白酶-EDTA聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法及克隆篩選法制備該細(xì)胞，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：經(jīng)表皮干細(xì)胞特異性標(biāo)志物（CK19、p63）免疫熒光鑒定，本細(xì)胞純度可達(dá)90%以上；經(jīng)檢測(cè)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等外源污染物，細(xì)胞活性良好。