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技術文獻

榛果源性核酸檢測試劑盒 PCR-熒光探針法反應五要素

文字:[大][中][小] 2022-8-15    瀏覽次數:743    
榛果源性核酸檢測試劑盒 PCR-熒光探針法反應五要素:

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Ser791)
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Ser94)
磷酸化雄激素受體抗體 phospho-Androgen Receptor (Tyr363)
錨定蛋白重復結構域蛋白激酶ANKK1抗體 ANKK1
磷酸化內收蛋白抗體 phospho-alpha Adducin (Thr445)
膜粘連蛋白11抗體 Annexin A11
膜粘連蛋白13抗體 Annexin A13
磷酸化促腎上腺皮質激素ACTH抗體 phospho-ACTH (Ser168)
磷酸化蛋白激酶AKT1抗體 phospho-AKT1 (Ser246)
磷酸化蛋白激酶B抗體 phospho-AKT1/3 (Tyr473)
磷酸化鈉鉀ATP酶蛋白a1抗體 phospho-alpha 1 Sodium Potassium ATPase (Tyr260) 
磷酸化內收蛋白a1抗體 phospho-alpha Adducin(Ser436)
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體 phospho-AMPK alpha 1 (Ser487)
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體 phospho-AMPK alpha 2 (Ser345)
酸性神經酰胺酶1抗體 ASAH1
粘附調節分子1抗體 ADRM1
氣味結合蛋白抗體 Aphrodisin
乙醛脫氫酶2抗體 ALDH2
膜粘連蛋白10抗體 Annexin A10
前梯度同源蛋白2抗體 Anterior Gradient 2


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